محیط کشت PDA

محيط كشت دكستروز آگار (Dextrose Agar) که بیشتر چون با سیب زمینی ایجاد میشود به محیطpotato dexteose agar از جمله محيط كشت­هاي عمومي هستند كه در آزمايشگاه کشت بافت برای مشخص شدن میزان بیماری قارچی و باکتریایی از آن‌ها استفاده مي­شود. معمولاً براي تهيه محيط كشت سيب زميني دكستروز آگار 250گرم سيب‌زميني تازه پوست كنده را به چهار قسمت مي‌كنيم (البته قطعه­ها را نبايد خيلي كوچك‌ كنيم و نيز آن‌ها را بصورت اسلايسي نبايد تهيه كنيم زيرا نشاسته بيش از حد خارج مي‌شود و در روند كار اختلال ايجاد مي­كند و محيط كشت بايد بدون نشاسته‌ي كافي باشد). و در يك "ماهي تابه" مدت 20 دقيقه روي اجاق گاز مي­گذاريم تا كاملاً بجوشد. زماني كه كاملاً پخته شدند عصاره آن را به وسيله پارچه­اي مي‌گيرم بطوريكه زلال و پاك باشد و هيچ نشاسته­اي (Starch) در آن وارد نشود.. در زمان عصاره­گيري به هيچ وجه سيب زميني پخته را له نمي­كنيم تا محلول زلال باشد. در محلول به دست آمده 20 گرم دكستروز كه مثل شكر است اضافه مي كنيم و به آرامي بهم مي‌زنيم. سپس آن را با هیتر برقی گرم میکنیم تا كاملاً حل شود. بعد از اين 20 گرم آگار (Agar) به آن اضافه مي­كنيم (آگار يا آگار- آگار جهت سفت كردن محيط‌هاي كشت ميكروبي بكار مي‌رود. پس از بهم زدن آن را به مدت 2 دقيقه روي هیتر برقی و هم زدن بوسیله مگنت آگار كاملاً حل می شود. پس از آن جهت استریل کردن محیط آن را در اتوكلاو به مدت ۱۵ دقيقه در دماي C °121 و فشار يك و نيم كيلوگرم بر سانتي‌متر مربع استريل مي­كنيم. وقتي كه محيط كشت استريل شد تقريباً 45 درجه گرما دارد و به وسيله دست مي‌توانيم اين را حدس بزنيم.

این محیط برای تشخیص زمان و مقدار استریل کردن مواد گیاهی بکار میرود. پس از اینکه محیط و زمان مناسب بدست آمد و مشخص شد که چه مقدار و چه زمانی در وایتکس لازم است تا محیط و مواد گیاهی کاملا ضد عفونی شود. محیط های مختلف مثل MS یا ... را آماده و کشت بافت را انجام می دهیم.

محیط کشت MS

محیط کشت MS برای اولین بار برای کشت بافت گیاه تنباکو توسط موراشی و اسکوگ در سال 1962 ساخته و مورد استفاده قرار گرفت. این محیط کشت با وجود اینکه برای تنباکو طراحی شده است ولی در بسیاری از گیاهان دیگر نیز کاربرد فراوانی دارد.

مقدار مورداستفاده از محیط کشت در هر لیتر آب مقطر : 43/4 گرم

محیط کشت MS تقریباً برای تمامی مراحل کشت گیاهان یعنی کشت جنین، کشت بساک و تخمدان، کشت کالوس و باززابی از کالوس و تمامی کارهای تحقیقاتی می تواند مورد استفاده قرار گیرد. البته برخی مواقع در فرمول آن تغییراتی ایجاد میشود تا بهترین نتیجه حاصل شود. ساخت این محیط کشت و محیط های کشت دیگر در خانه برای کشت بافت تفریحی و آزمایشی هزینه ی زیادی لازم دارد زیرا باید مواد مورد استفاده از کیفیت بالایی برخوردار باشند و وزن کردن موادی که به مقدار بسیار کم مواد استفاده قرار می گیرند به ترازوهای بسیار دقیق (با دقت هرازم گرم) نیاز دارد که گران قیمت هستند و برای اسفاده شرایط خاصی را باید فراهم کرد تا از گرد و خاک دور باشد و از تکان خوردن ترازو جلوگیری شود.

در صورت علاقه به انجام کشت بافت می توانید از بازار محیط کشت آماده MS را تهیه کنید یا از طریق اینترنت از خارج از کشور تهیه کنید که ارزانتر تمام میشود و می توانید بدون تغییر در فرمول آن گیاهانی مانند رُز، بگونیا و بنفشه آفریقایی و لیلیوم را سریع تر تکثیر کنید.